Đặt hàng primer/probe ( đoạn mồi) theo yêu cầu

Primer hay đoạn mội là một sợi nucleic acid (hoặc ribonucleic acid) dùng để làm đoạn mồi đúng như cái tên của nó, mồi khởi đầu cho quá trình nhân đôi(replication) của DNA. Hầu hết các enzyme xúc tác quá trình nhân đôi( DNA polymerase ) phải cần primer để bắt đầu tổng hợp một đoạn DNA mới. Vì nó chỉ gắn các nucleotide vào sợi primer có sẵn theo nguyên tắc bổ sung với sợi khuôn.

Bình thường thì các đoạn primer hoặc probe được nhà sản xuất cung cấp ở dạng đông khô và cần phải pha ra mới sử dụng được, thường pha với nước hoặc các dung dịch đệm.

Các primer thường pha ra ở nồng độ 100 µM hoặc 100 pmol/µl; đó là nồng độ stock. Cần pha loãng ra nồng độ thông thường đó là 10 µM, hoặc nồng độ tùy chỉnh theo quy trình của master mix.

Cần xem trên nhãn của ống primer số nmol là bao nhiêu, rồi đem nhân cho 10, kết quả thu được chính là thể tích (µl) nước hoặc dung dịch đệm sử dụng cho hoàn nguyên primer/probe để đạt được nồng độ là 100 µM.

Ví dụ như trên nhãn ống primer là 30.0 nmol thì lúc này mình chỉ cần bổ sung thêm 300 µl nước hoặc dung dịch đệm. Nồng độ ống primer lúc này là 100 µM.

Công thức sử dụng :C1 x V1 = C2 x V2

Ví dụ: Nồng độ ban đầu là C1 (10 µM), V1 là thể tích ống gốc cần hút. C2 là nồng độ sử dụng (ví dụ 1 µM), V2 là thể tích của ống sử dụng cần pha (ví dụ 50 µL). Do đó, V1= (1*50)/10 = 5 µL

Do đó, chúng ta cần hút 5 µl của ống gốc nồng độ 10 µM và bổ sung thêm 45 µl nước để được ống nồng độ sử dụng 1 µM có thể tích 50 µl.